NAD+, NMN et glutathion : manipuler des cofacteurs sensibles
Structures, masses, sensibilité à l’humidité, au pH et à l’oxydation, quantification UV à 260 nm : la manipulation au laboratoire de trois cofacteurs du catalogue.
Publié le · 3 min de lecture
Le NAD+, le NMN et le glutathion ne sont pas des peptides au sens strict (sauf le glutathion, un tripeptide), mais ils sont rangés avec les peptides mitochondriaux dans notre catalogue parce qu’ils servent souvent dans les mêmes études. Ce sont des cofacteurs : petites molécules hydrophiles, vendues en grandes quantités (500 mg à 1,5 g), et sensibles chacune à sa manière.
Fiches
| NAD+ | NMN | Glutathion (GSH) | |
|---|---|---|---|
| Nom | Nicotinamide adénine dinucléotide | β-Nicotinamide mononucléotide | γ-L-Glutamyl-L-cystéinyl-glycine |
| Formule | C21H27N7O14P2 | C11H15N2O8P | C10H17N3O6S |
| Masse molaire | 663,4 g/mol | 334,2 g/mol | 307,3 g/mol |
| CAS | 53-84-9 | 1094-61-7 | 70-18-8 |
| Point sensible | Hydrolyse en milieu basique | Hygroscopie | Oxydation en GSSG |
NAD+ : stable à l’acide, fragile en base
Le NAD+ est la forme oxydée du dinucléotide. Il est relativement stable en solution légèrement acide et se dégrade rapidement en milieu basique (rupture de la liaison nicotinamide-ribose). La forme réduite NADH se comporte à l’inverse. Pour une solution de NAD+ :
- eau ou tampon à pH 6–7, sans base forte ;
- aliquots congelés, pas de conservation prolongée au réfrigérateur ;
- quantification par absorbance à 260 nm (ε ≈ 18 000 M⁻¹·cm⁻¹, noyau adénine). Le NADH présente en plus une bande à 340 nm absente du NAD+, utile pour vérifier l’état d’oxydation.
NMN : attention à l’humidité
Le NMN est très hygroscopique : une poudre exposée à l’air humide s’agglomère et peut prendre un aspect pâteux, ce qui accélère l’hydrolyse. Pour un flacon de 500 mg ou 1 g utilisé en plusieurs fois :
- laisser revenir le flacon à température ambiante avant ouverture ;
- prélever rapidement avec une spatule sèche ;
- refermer, éventuellement sous gaz inerte, et ranger avec un dessicant.
Absorbance à 266 nm (noyau nicotinamide) pour la quantification. Le NMN est le précurseur direct du NAD+ dans la voie de récupération ; on l’utilise comme substrat dans les études enzymatiques sur les NMNAT.
Glutathion : surveiller l’oxydation
Le glutathion réduit (GSH) est un tripeptide particulier : son glutamate est lié par sa chaîne latérale (liaison γ) à la cystéine. Son thiol libre s’oxyde à l’air en disulfure GSSG (dimère, 612,6 g/mol), d’autant plus vite que le pH est élevé et que des traces de métaux sont présentes (voir Ponts disulfure).
| Mesure | Effet |
|---|---|
| Solvant dégazé, pH < 7 | Ralentit l’oxydation |
| EDTA (si compatible) | Chélate les métaux catalyseurs |
| Préparation extemporanée | Évite l’accumulation de GSSG |
| Réactif d’Ellman (DTNB, 412 nm) | Mesure les thiols libres restants |
Le glutathion n’absorbe pas à 280 nm ; son suivi se fait par HPLC (214 nm) ou par le réactif d’Ellman.
Les grandes masses changent la manipulation
Contrairement aux peptides en flacons de 5 ou 10 mg, ces cofacteurs se prélèvent souvent par pesée. Une balance au 0,1 mg suffit à cette échelle, mais l’humidité reprise pendant les ouvertures successives fausse les pesées suivantes. Préparer une solution mère concentrée unique, puis l’aliquoter, est plus fiable que des pesées répétées (voir Aliquotage).
Dans le catalogue
NAD+ (500 mg, 1 g), NMN (500 mg, 1 g) et glutathion (1 500 mg), dans la famille Mitochondriaux et cofacteurs avec les peptides présentés dans MOTS-c et humanine.
