Eau bactériostatique : composition et usage au laboratoire

L’eau bactériostatique est le solvant le plus utilisé pour mettre en solution un peptide lyophilisé. Elle n’est pourtant pas toujours le bon choix. Voici ce qu’elle contient, ce que fait son conservateur et quand lui préférer une autre eau.

Composition

L’eau bactériostatique est une eau stérile contenant 0,9 % d’alcool benzylique (9 mg/mL), conditionnée en flacon serti. L’alcool benzylique (C6H5CH2OH) est un conservateur : à cette concentration, il n’est pas stérilisant mais inhibe la croissance bactérienne. C’est ce qui permet de ponctionner le flacon plusieurs fois.

Ce que le conservateur permet, et ce qu’il ne permet pas

Il permet de réutiliser un flacon entamé pendant plusieurs semaines sans prolifération microbienne, à condition de désinfecter le septum à chaque prélèvement et de conserver le flacon au frais.

Il ne garantit pas la stabilité chimique du peptide en solution. L’alcool benzylique empêche les bactéries de se développer ; il n’empêche ni l’hydrolyse, ni l’oxydation, ni l’agrégation. Une solution de peptide reste à conserver au réfrigérateur sur une courte durée, ou aliquotée et congelée (voir Aliquotage et cycles congélation-décongélation).

Quand ne pas l’utiliser

Situation	Solvant à préférer
Essai cellulaire sensible aux solvants organiques	Eau stérile sans conservateur
Peptide peu soluble à pH neutre, riche en résidus basiques	Eau acidifiée à l’acide acétique
Peptide très hydrophobe ou lipopeptide	Petit volume de DMSO puis dilution (voir peptides hydrophobes)
Analyse HPLC ou MS de la solution	Eau de qualité HPLC, sans additif
Préparation destinée à être lyophilisée de nouveau	Eau sans conservateur (l’alcool benzylique ne se sublime pas proprement)

L’alcool benzylique absorbe aussi dans l’UV (pic vers 257 nm) : il perturbe une quantification à 280 nm et apparaît comme un pic en HPLC.

Bonnes pratiques avec un flacon multi-prélèvement

1. Noter la date d’ouverture sur l’étiquette.
2. Désinfecter le septum à l’alcool isopropylique à 70 % avant chaque ponction, laisser sécher.
3. Utiliser une aiguille et une seringue stériles neuves pour chaque prélèvement.
4. Conserver entre 2 et 8 °C après ouverture et jeter le flacon au bout de 28 jours, ou plus tôt s’il devient trouble.

Eau bactériostatique, eau stérile, eau acidifiée : récapitulatif

• L’eau bactériostatique (3 ou 10 mL) : le choix par défaut pour les peptides solubles dans l’eau, quand la solution sera prélevée plusieurs fois.
• L’eau stérile (10 mL) : sans conservateur, pour un usage unique ou les essais où l’alcool benzylique interférerait.
• L’eau acétique 0,6 % : pour les peptides qui se dissolvent mal à pH neutre. Voir Eau acidifiée à l’acide acétique.

Les volumes à utiliser pour atteindre une concentration donnée sont calculés dans Calculer la concentration d’une solution mère, et la méthode complète de mise en solution dans Mettre en solution un peptide lyophilisé. Pour transférer une solution, les flacons stériles sertis complètent la gamme des fournitures de laboratoire.